ATCC細胞株培養(yǎng)操作：

　　將凍存的ATCC細胞株從有干冰的包裝中取出，理解復蘇培養(yǎng)，或迅速轉移放置在液氧罐氣相層在——130°C以下的度存儲。

　　1、先準備好細胞培養(yǎng)皿或細胞株培養(yǎng)瓶，及產品說明推薦的相應細胞培養(yǎng)基。并在37°c水浴中預先溫熱細胞培養(yǎng)基

　　2、小心取出裝有細胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋一下的部分置于37°C水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應該盡快，大約短于2分鐘或待zui后一塊小冰晶體剛融化，就應該將細胞凍存管取出水浴。

　　3、在從水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用于菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴格操作。

　　4、小心擰干凍存管的頂部，將管內容物用1MI移槍轉移到9毫升培養(yǎng)基的無菌離心管中。離心5到7分鐘（125*g）.小心吸去上清液以去除抗凍劑（二甲基亞砜），避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的*培養(yǎng)基中。將細胞懸液轉移到培養(yǎng)容器，輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長較慢的細胞株可重懸于5——8mI培養(yǎng)基并轉移到T125培養(yǎng)瓶。生長較快的細胞株可重懸于12——20mI培養(yǎng)基并轉移到T75培養(yǎng)瓶。

　　5、將細胞培養(yǎng)容器置于細胞培養(yǎng)箱，在溫度37°C二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進行卵育。細胞培養(yǎng)24小時候后應在顯微鏡下觀察細胞株形態(tài)和生長狀況 。

　　ATCC細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養(yǎng)細胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講，可培養(yǎng)到40-50代。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。對于人類腫瘤細胞，在體外培養(yǎng)半年以上，生長穩(wěn)定，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。

>> 返回首頁